El exámen visual microscópico de la materia viva ha mejorado notablemente gracias al desarrollo tecnológico de los instrumentos de observación. El microscopio óptico compuesto (consta de dos juegos de lentes: el ocular y el objetivo) es un instrumento indispensable en la investigación de los tejidos animales y vegetales.
- Tipos de microscopios ópticos
Existen diversos tipos de microscopios ópticos:
+ El microscopio estereoscópico o lupa binocular
El microscopio estereoscópico, también llamado lupa binocular, permite apreciar el relieve de la muestra, ya que tanto el ocular como el objetivo están duplicados.
+ El microscopio binocular
El microscopio binocular permite observar con ambos ojos, pero no se aprecia relieve, ya que solo está duplicado el ocular.
+ El microscopio monocular
El microscopio monocular utiliza solamente un objetivo y un ocular. Tanto este como el binocular permiten observaciones a mayor aumento y con más resolución de la imagen que con el microscopio estereoscópico.
- Aumento, poder de resolución y tamaño mínimo observable
+ Aumento del microscopio
El aumento de un microscopio es la relación entre una dimensión lineal de la imagen que vemos y la dimensión del objeto real. Se calcula multiplicando los aumentos del ocular por los del objetivo.
+ Apertura numérica del objetivo
La apertura numérica del objetivo (AN) es un parámetro que permite calcular el poder de resolución y el tamaño mínimo observable. Viene dada por la expresión: AN = n sen u, siendo n el índice de refracción del medio existente entre el objeto y la lente frontal del objetivo, y u el semiángulo de apertura del objetivo.
+ Poder de resolución o poder separador
El poder de resolución o poder separador (PR) es la propiedad más importante en un microscopio, ya que de ella depende la nitidez con que se perciben los detalles.
+ Tamaño mínimo observable o límite de resolución
El tamaño mínimo observable o límite de resolución (D) es la distancia mínima a la que tienen que estar dos puntos de la muestra para que puedan verse como distintos. También puede definirse como la anchura mínima de una rendija o de un objeto para que resulten visibles al microscopio.
+ Longitud de onda e inmersión de la lente frontal en líquido
Según la longitud de onda de la radiación utilizada, se pueden apreciar los objetos con mayor o menor detalle. Así, la microscopía de radiación ultravioleta, que utiliza una longitud de onda más corta que la visible, permite conseguir más detalle que el obtenido con luz ordinaria. También se consigue mejorar la calidad de la observación mediante la inmersión de la lente frontal del objetivo en aceite de cedro o en otro líquido adecuado.
+ Requisitos de la muestra procesada
La muestra procesada debe ser una lámina plana, rígida y delgada, y puede estar coloreada.
Estos requisitos son necesarios para que la muestra pueda enfocarse, se manipule con facilidad, deje pasar la luz a través de ella y se puedan diferenciar las distintas estructuras.